1. Presentazione del prodotto
Nome del prodotto: polvere probiotica dal sapore orale
Specifiche del prodotto: 2 g*30 pezzi/scatola
Indicazioni: la composizione del ceppo fornita da questo prodotto può inibire la crescita dei principali batteri patogeni che causano l'alitosi e può alleviare efficacemente i sintomi dell'alitosi.
Istruzioni per l'uso: 3 volte al giorno, 1 compressa ogni volta; si consiglia di assumere la polvere secca per via orale direttamente dopo i pasti. Le persone con alitosi cronica hanno bisogno di assumerlo a lungo finché il loro alito non diventa fresco.
Metodo di conservazione: conservare in luogo fresco, preferibilmente refrigerato a 4 gradi.
Conta vitale: Miscela di probiotici (50 miliardi di CFU/g), Bacillus coagulans PB-BC 02 (20 miliardi di CFU/g) e Lactobacillus salivarius HH-LS 17 (30 miliardi di CFU/g).
Altri ingredienti: 200 mg di sorbitolo, 200 mg di acido citrico, 200 mg di menta piperita in polvere, 200 mg di vitamina C, 100 mg di fruttooligosaccaride, 200 mg di galattoligosaccaridi, 100 mg di sucralosio, 100 mg di aroma alimentare.
2. Patogenesi
La flora orale è un componente chiave della barriera della mucosa orale e della risposta immunitaria, che può resistere all’invasione degli agenti patogeni e prevenire e curare le malattie orali. Lo squilibrio microecologico orale può distruggere la barriera della mucosa orale e fornire le condizioni per la colonizzazione di batteri che producono odori, causando così malattie orali come l’alitosi. L’alitosi orale (IOH) rappresenta dall’80% al 90% dell’alitosi ed è causata principalmente dalla produzione di composti volatili dello zolfo da parte di microrganismi orali. Il Fusobacterium nucleatum può decomporre i substrati contenenti zolfo nella cavità orale in composti volatili di zolfo. I composti volatili dello zolfo (VSC) e i loro metaboliti possono anche produrre sostanze come scatolo, cadaverina, indolo e putrescina, che possono causare cattivo odore orale.
Attualmente, i trattamenti convenzionali per l'alitosi comprendono principalmente la rimozione meccanica (lavarsi i denti, raschiare la lingua, ecc.), la terapia chimica (collutorio alla clorexidina, gomma da masticare, ecc.) e l'uso della medicina tradizionale cinese e di prodotti naturali (polifenoli del tè , vitamina C, catechine, ecc.). e l'uso di probiotici, ecc. I metodi di trattamento tradizionali hanno effetti a breve termine e l'uso a lungo termine può causare uno squilibrio della flora orale. I probiotici possono regolare la flora orale dalla radice e inibire la crescita dei batteri che producono odori. Pertanto, l’uso dei probiotici per trattare l’alitosi è gradualmente diventato un punto focale della ricerca.
3. Meccanismo dei probiotici che migliora l'alitosi
Come le malattie con cause microbiche, come la carie dentale e la parodontite, l’alitosi può essere trattata a livello microbico prendendo di mira i batteri responsabili ad esso associati. I probiotici possono inibire la crescita dei batteri patogeni orali, regolare la flora orale e mantenere la salute della microecologia orale. I principali meccanismi attraverso i quali agiscono i probiotici includono i seguenti aspetti: (1) Competere per i siti di legame, ridurre la colonizzazione di batteri patogeni e coaggregarsi con batteri patogeni. ; (2) Competere per nutrienti e fattori di crescita e produrre sostanze antibatteriche; (3) Migliorare la risposta immunitaria dell'ospite e inibire la produzione di citochine proinfiammatorie indotte da agenti patogeni.
4. Probiotici di Hehe Biotech per migliorare l'alito cattivo
Il numero di ceppo di Bacillus coagulans è PB-BC02 e il nome è Bacillus coagulans. È depositato nel China Type Culture Collection Center presso l'Università di Wuhan a Wuhan, in Cina. La data di deposito è il 12 dicembre 2018. Il numero di deposito è CCTCC NO: M2018889.
5. Valutazione dell'effetto di miglioramento dell'alitosi
In questo studio, 5 ceppi probiotici sono stati inizialmente selezionati valutando la capacità dei probiotici di inibire la produzione di H2S da parte del Fusobacterium nucleatum e valutata ulteriormente la capacità di 5 ceppi probiotici di inibire la produzione di composti solforati volatili (VSC) e biofilm da parte del Fusobacterium. nucleato. Bacillus coagulans PB-BC 02 e Lactobacillus salivarius HH-LS 17 erano due ceppi di probiotici con buoni effetti in vitro. Infine, sono stati confrontati i tassi inibitori dei probiotici a ceppo singolo e dei probiotici composti sulla crescita del Fusobacterium nucleatum. I risultati hanno mostrato che il complesso L’effetto inibitorio dei probiotici sulla crescita del Fusobacterium nucleatum è migliore di quello dei singoli batteri, indicando che la combinazione di Bacillus coagulans PB-BC 02 e Lactobacillus salivarius HH-LS 17 ha l’effetto di migliorare l’alitosi . I metodi di prova e i risultati sono i seguenti:
5.1 La capacità dei probiotici di inibire la produzione di H2S da parte del Fusobacterium nucleatum
Principio del test: la reazione di H2S e FeSO4 per produrre il precipitato FeS di solfuro ferroso nero viene utilizzata per valutare la capacità di diversi probiotici di inibire la produzione di H2S da parte del Fusobacterium nucleatum.
Operazione specifica: preparare una soluzione di solfato ferroso e tiosolfato di sodio, filtrarla attraverso una membrana filtrante sterile da {{0}},22 μm e aggiungerla al terreno di coltura BHI per ottenere la concentrazione finale di solfato ferroso e tiosolfato di sodio. tiosolfato di sodio 0.2‰ e tiosolfato 0,3‰, quindi è stata aggiunta una sospensione batterica di Fusobacterium nucleatum al 2% da 109 CFU/ml, seguita da una soluzione batterica probiotica al 5% e coltivata in anaerobiosi a 37 gradi per 36 ore.
Risultati del test: screening basato sulla quantità di precipitazioni prodotte. "-" significa assenza di precipitazione, indicando che i probiotici hanno una forte capacità inibitoria contro il Fusobacterium nucleatum. "+" ha poche precipitazioni, "++" ha molte precipitazioni e " +++" ha molti sedimenti. I risultati sono mostrati nella Tabella 1. Tra i 31 ceppi probiotici, 11 ceppi hanno avuto una piccola precipitazione, 8 ceppi hanno avuto molta precipitazione, 7 ceppi hanno avuto una grande quantità di precipitazione e 5 ceppi (Lactobacillus acidophilus HH-LA26, Lactobacillus paracasei HH-LP58, Lactobacillus salivarius HH-LS17, Lactobacillus bifidum HH-BL18 e Bacillus coagulans PB-BC 02) non hanno mostrato precipitazioni, indicando il loro potenziale nel migliorare l'alitosi.
Tabella 1 Capacità di 31 ceppi probiotici di inibire la produzione di H2S da parte del Fusobacterium nucleatum
|
sottoporre a tensione |
numero di ceppo |
Quantità di precipitazioni |
sottoporre a tensione |
numero di ceppo |
Quantità di precipitazioni |
|
Lactobacillus plantarum |
HH-LP56 |
+ |
Pediococcus acidilactici |
HH-PA29 |
++ |
|
Lactobacillus plantarum |
HH-LP78 |
+ |
Pediococcus pentosaceus |
HH-PP57 |
+++ |
|
Lactobacillus reuteri |
PB-LR09 |
+ |
Lactococcus lactis subsp. lattis |
HH-LLL39 |
+++ |
|
Lactobacillus acidophilus |
HH-LA26 |
- |
Lactococcus lactis subsp. cremoris |
HH-LLC36 |
+++ |
|
Lactobacillus rhamnosus |
PB-LR76 |
+ |
Lactococcus lactis subsp. diacetile |
HH-LLD37 |
+++ |
|
Lactobacillus casei |
PB-LC39 |
+ |
Bifidobacterium lactis |
HH-BA68 |
++ |
|
Lactobacillus paracasei |
HH-LP58 |
- |
Bifidobacterium breve |
HH-BR26 |
+ |
|
Lactobacillus salivarius |
HH-LS17 |
- |
Bifidobacterium lungo |
HH-BL18 |
- |
|
Lactobacillus bulgaricus |
HH-LB57 |
++ |
Bifidobacterium bifidum |
HH-BB27 |
++ |
|
Lactobacillus helveticus |
HH-LPH17 |
+ |
Bifidobacterium infantis |
HH-BI27 |
++ |
|
Lactobacillus johnsonii |
LBJ 456 |
+ |
Bifidobacterium adolescentis |
HH-BA07 |
+++ |
|
Lactobacillus gasseri |
HH-LG07 |
+ |
Lactobacillusequi Kumulus subsp. |
HH-LK08 |
+++ |
|
Lactobacillus fermentum |
HH-LF392 |
+ |
Bacillus coagulans |
PB-BC02 |
- |
|
Lactobacillus croccante |
HH-LC323 |
++ |
Acetobacter tropicalis |
HH-AT01 |
+++ |
|
Lactobacillus sakei |
LSS858 |
++ |
Lactobacillus plantarum |
N-1 |
+ |
|
Streptococco termofilo |
HH-ST08 |
++ |
5.2 La capacità dei probiotici di inibire la produzione di composti solforati volatili (VSC) da parte del Fusobacterium nucleatum
Metodo del test: cinque ceppi di probiotici sono stati inizialmente selezionati in base alla loro capacità di inibire la produzione di H2S da parte del Fusobacterium nucleatum e le VSC prodotte dal Fusobacterium nucleatum sono state ulteriormente quantificate utilizzando uno strumento Halimeter. Alla provetta Hungate sono stati aggiunti un totale di 2 ml di sospensione batterica di Fusobacterium nucleatum da 107 CFU/ml e una soluzione batterica probiotica al 15% (v/v). Dopo una co-coltura di 9 ore, è stata misurata la capacità dei probiotici di inibire la produzione di Fusobacterium nucleatum. capacità delle VSC.
Risultati dei test: i VSC sono i principali responsabili dell'alitosi. Non solo riflettono il grado di alito cattivo, ma danneggiano anche il tessuto gengivale, che è un indicatore molto importante. Misurando il tasso di inibizione dei cinque ceppi ottenuti dallo screening preliminare sulle VSC prodotte da Fusobacterium nucleatum, i ceppi sono stati ulteriormente sottoposti a screening. I risultati sono mostrati nella Tabella 2. Tra questi, la capacità inibitoria di 3 ceppi era maggiore dell'80% e il tasso di inibizione di 2 ceppi era maggiore dell'80%. Sotto il 70%. Pertanto, tre ceppi probiotici tra cui Lactobacillus salivarius HH-LS17, Lactobacillus bifidus longum HH-BL18 e Bacillus coagulans PB-BC02 sono stati selezionati per studiare i loro effetti sulla formazione del biofilm del Fusobacterium nucleatum.
Tabella 2 Effetto dei probiotici sulla produzione di VSC da parte del Fusobacterium nucleatum
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sottoporre a tensione |
numero di ceppo |
Tasso di inibizione |
|
Lactobacillus acidophilus |
HH-LA26 |
66% |
|
Lactobacillus paracasei |
HH-LP58 |
63% |
|
Lactobacillus salivarius |
HH-LS17 |
86% |
|
Lactobacillus bifidum longum |
HH-BL18 |
83% |
|
Bacillus coagulans |
PB-BC02 |
90% |
5.3 La capacità dei probiotici di inibire la formazione del biofilm di Fusobacterium nucleatum
Metodo del test: regolare la concentrazione batterica di Fusobacterium nucleatum a 107 CFU/mL e lasciarla riposare per 9 ore. Quindi aggiungilo a una 96-piastra a pozzetti. Aggiungere 180 μL di sospensione batterica aggregata di Fusobacterium e 20 μL di soluzione batterica probiotica in ciascun pozzetto. 37 Coltivazione a grado per 48 h. Nel gruppo di controllo negativo è stato aggiunto lo stesso volume di terreno MRS al posto del liquido probiotico e nel controllo in bianco è stato aggiunto lo stesso volume di BHI al posto del liquido probiotico. Dopo l'incubazione, lavare due volte con tampone PBS, quindi fissare con metanolo al 99% per 15 minuti, eliminare il surnatante e asciugare a temperatura ambiente. Una volta completata l'asciugatura, aggiungere 100 μL di soluzione di cristalvioletto allo 0,1% in ciascun pozzetto, colorare per 5 minuti, lavare due volte con acqua sterile dopo la colorazione, quindi riporre a temperatura ambiente fino a completa asciugatura. Infine, aggiungere 200 μL di soluzione di acido acetico al 33% per la dissoluzione. Dopo la miscelazione con una pipetta, pipettare 175 μL da ciascun pozzetto e aggiungerli a una nuova piastra a pozzetti 96-, quindi leggere il valore di assorbanza a 570 nm con un lettore per micropiastre. Il metodo di calcolo della riduzione mediata dal biofilm è il tasso di inibizione (%)=(biofilm di controllo negativo - quantità di biofilm di intervento surnatante)/biofilm di controllo negativo.
Risultati del test: le tasche parodontali e il rivestimento della lingua sono fattori di rischio per l'alitosi perché forniscono un ambiente di crescita ideale per i batteri che producono VSC e altre molecole di odore. I microrganismi solitamente esistono sotto forma di biofilm nelle tasche parodontali e nel rivestimento della lingua. Il Fusobacterium nucleatum funge da batterio ponte intermedio nella formazione della placca dentale. La formazione del suo biofilm è la chiave per causare l’alitosi. Pertanto, inibire il suo biofilm è un passo importante per alleviare l’alitosi. Le possibilità sono fornite. Il metodo di colorazione cristalvioletto è stato utilizzato per determinare la capacità del Lactobacillus di inibire la formazione di biofilm da parte del Fusobacterium nucleatum. I risultati sono mostrati nella Tabella 3. Quando è stata aggiunta la soluzione batterica probiotica al 5%, Bacillus coagulans PB-BC 02 e Lactobacillus salivarius HH-LS 17 hanno il miglior effetto di inibizione, superiore al 35%. Sulla base dei risultati dell’inibizione della produzione di VSC e biofilm da parte del Fusobacterium nucleatum, Bacillus coagulans PB-BC 02 e Lactobacillus salivarius HH-LS 17 hanno effetti in vitro migliori. Successivamente vengono valutati i loro effetti sulla crescita del Fusobacterium nucleatum.
Tabella 3 Effetti inibitori dei probiotici sul biofilm del Fusobacterium nucleatum
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sottoporre a tensione |
numero di ceppo |
Tasso di inibizione |
|
Lactobacillus acidophilus |
HH-LA26 |
27.34% |
|
Lactobacillus paracasei |
HH-LP58 |
25.72% |
|
Lactobacillus salivarius |
HH-LS17 |
39.77% |
|
Lactobacillus bifidum longum |
HH-BL18 |
33.86% |
|
Bacillus coagulans |
PB-BC02 |
38.65% |
5.4 Effetto dei probiotici sulla crescita del Fusobacterium nucleatum
Metodo del test: aggiungere 190 μL di sospensione batterica di Fusobacterium nucleatum da 107 CFU/ml a ciascun pozzetto di una piastra a pozzetti 96-, quindi aggiungere 10 μL di soluzione batterica probiotica, coltivare in anaerobiosi a 37 gradi e monitorare a 600 nm ogni 3 ore. Misurare il valore di assorbanza e tracciare una curva di crescita.
Risultati del test: Molte malattie orali sono causate da uno squilibrio della flora orale. Una certa capacità antibatterica aiuta i probiotici a regolare la flora orale. I risultati sono mostrati nella Figura 1. L'effetto inibitorio dei probiotici sul Fusobacterium nucleatum è nell'ordine dei probiotici composti > Lactobacillus salivarius HH-LS 17 > Bacillus coagulans PB-BC 02 > Gruppo di controllo medio MRS, indicando che entrambi i ceppi di probiotici sono Può inibire la crescita del Fusobacterium nucleatum e la combinazione dei due ceppi ha un migliore effetto inibitorio sul Fusobacterium nucleatum.

Figura 1 Effetto dei probiotici sulla crescita del Fusobacterium nucleatum
In sintesi, Bacillus coagulans PB-BC 02 e Lactobacillus salivarius HH-LS 17 possono inibire la produzione di H2S, VSC e biofilm da parte del Fusobacterium nucleatum e la capacità di inibire la crescita del Fusobacterium nucleatum dopo la composizione è più forte di quella dei singoli ceppi, indicando che la combinazione di Bacillus coagulans PB-BC 02 e Lactobacillus salivarius HH-LS 17 può migliorare l'alitosi.
Riferimenti:
[1] Karbalaei M, Keikha M, Kobyliak NM, Khatib Zadeh Z, Yousefi B, Eslami M. Alleviamento dell'alitosi mediante l'uso di probiotici e dei loro meccanismi protettivi nella cavità orale. Nuovi microbi Nuovi infetti. 2021 aprile 23;42:100887. doi: 10.1016/j.nmni.2021.100887. PMID: 34123388; ID PMC: PMC8173312.
[2] Penala S, Kalakonda B, Pathakota KR, Jayakumar A, Koppolu P, Lakshmi BV, Pandey R, Mishra A. Efficacia dell'uso locale dei probiotici in aggiunta al ridimensionamento e alla levigatura delle radici nella parodontite cronica e nell'alitosi: uno studio randomizzato controllato prova. J Res Pharm Pract. Aprile-giugno 2016;5(2):86-93. doi: 10.4103/2279-042X.179568. PMID: 27162801; ID PMC: PMC4843589.
[3] Jiang Zhentao. Screening dei lattobacilli che inibiscono il Fusobacterium nucleatum e valutazione della loro efficacia nel migliorare l'alitosi [D]. Università di Jiangnan, 2022. DOI: 10.27169/d.cnki.gwqgu.2022.000533.
[4] Huang Zhiqiang, Cheng Yongbo. Costruzione e valutazione di un modello di alitosi nel ratto causata da uno squilibrio della flora orale [J]. Ricerca sulla medicina orale, 2023, 39(08): 745-750. DOI: 10.13701/j. cnki.kqyxyj.2023.08.015.
[5] Yang Wenjie, Ye Wei. Studio in vitro sull'effetto antibatterico di due tipi di probiotici sui batteri che causano l'alitosi [J]. Medicina orale, 2015, 35(03):179-182.DOI:10.13591/j.cnki.kqyx .2015.03.005.
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